918博天娱乐官网的人B细胞淋巴瘤OCILy19培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：人B细胞淋巴瘤OCILy19

生长特性：悬浮生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640 + 10% FBS + 1% P/S

传代方法：初次传代建议1:2，换液需每2天进行。

备注：用无菌离心管收集瓶内的培养基，供过渡对比之用。若对比结果不佳，建议直接购买我们的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后应尽快培养至良好状态，充满完全培养液并严密封闭瓶口为最佳处理方式。使用75%酒精对细胞瓶进行消毒后，放入超净工作台内进行无菌操作。将细胞瓶置于37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态。观察细胞生长情况并拍摄不同倍数的照片（建议40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片为售后服务的重要依据，若不提供照片则默认细胞状态良好。传代后应使用原瓶的完全培养基和自配的完全培养基进行对比培养，换液后需松开瓶盖。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，需将培养瓶内的完全培养液收集至离心管，保留5ml的完全培养基并放入37℃、5% CO2的孵箱中培养；若细胞密度超过80%，则可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去上清液，用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。
2. 向培养瓶中添加2.5%胰蛋白酶消化液约1-2ml，放入37℃培养箱中消化1-2分钟，再在显微镜下观察。如果细胞大部分变圆并脱落，及时取出并轻轻敲击瓶子，加5ml完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，确保完整脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，1000RPM下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 根据1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时，弃去培养液后用PBS洗涤细胞一次。
2. 加入2.5%胰蛋白酶消化液约1ml，踢翻培养瓶观察，待细胞回缩、变圆后加入5ml完全培养基以终止消化。轻轻吹打细胞使其脱落后，将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清液，添加1ml的雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后装入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱，如后期需转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱中存放24小时以上。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（请佩戴防护面具），迅速置于37℃水浴中解冻，直至冻存管内无结晶，然后用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管内细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
3. 弃去上清，加用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，放入37℃、5% CO2培养箱中培养。
4. 第二天换用新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，部分细胞可能不牢固贴壁，容易脱落，这属于正常现象。如有较多细胞脱落，收集培养液至离心管中，1000rpm离心5分钟以收集上清用于过渡培养（后期对比培养），沉淀部分加1-2ml胰酶泵打，重悬后消化1-2分钟，再加5ml完全培养基终止消化。再进行离心，弃去上清，加1-2ml完全培养基重悬，然后按1:2的比例进行分瓶传代（每瓶5-8ml），最终放入37℃、5% CO2的培养箱中培养。

五、售后条款

1）细胞出现问题，可重发的情况

1. 运输途中出现各种问题，如细胞丢失、瓶身破损或培养液严重漏液等，属重发。
2. 细胞污染问题，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，经核实后可重发。
3. 常温发货细胞静置24小时或干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内，若大多数细胞不存活（需提供真实清晰的细胞状态照片），可重发。
4. 如干冰冻存发货的细胞复苏后24小时或常温发货的细胞静置4小时后未开封发生污染，亦可重发。
5. 细胞活性问题请在收货7天内提供真实实验结果，如通过台盼蓝染色法鉴定细胞活力，核实后可重发。
6. 收到当日及第2、3天拍照记录，超过3天未告知的视为产品合格。若在4-7天内出现问题，需提供前三天照片与细胞问题时的照片，以及操作步骤的详细记录，由技术人员判定责任。

2）细胞出现问题，不予重发的情况

1. 客户导致的细胞污染，无法重发。
2. 因客户不正确操作致使细胞状态不良，无法重发。
3. 使用非本库推荐的细胞培养体系导致的细胞状态不良，无法重发。
4. 细胞状态不良且未提供培养前的前三天照片，不予重发。
5. 细胞培养过程中有其他处理的不予重发。
6. 收到细胞两天内未及时告知的问题，不予重发。
7. 具体问题具体分析。

以上说明由918博天娱乐官网出具，确保您能够妥善处理细胞培养及存储过程中的各类问题。如有疑问，请随时联系我们获取更多信息。