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血清脂蛋白电泳实验步骤 | 918博天娱乐官网

来源:傅英永 日期:2025-03-25

实验原理:本实验旨在通过电泳分离血清脂蛋白,以解析其组成。首先,使用脂类染料(如苏丹黑或油红O)对血清脂蛋白进行预染。接着,将预染过的血清样品置于琼脂糖凝胶板上进行电泳。通电后,脂蛋白会向正极移动,并根据其电性与大小分离为几个区域带。

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试剂与器材:本实验所需材料包括:巴比缓冲液(pH 8.6,离子强度 0.075),由巴比/妥钠、EDTA酸及去离子水混合制成;三羟甲基/氨基甲/烷缓冲液(pH 8.6),也是由三甲基氨/基甲/烷、EDTA酸、NaCl与去离子水构成;琼脂糖凝胶则由琼脂糖与上述缓冲液配制而成。此外,工具包括特制的切口刀与挖槽小匙,以及用于电泳的仪器和槽。

操作步骤:首先,进行血清的预染,将0.2 ml血清与0.2 ml苏丹黑染色液混合后,置于37℃的水浴中染色30分钟,然后进行离心(2000转/分约5分钟)。接着,制备琼脂糖凝胶板,将事先配制好的0.45%琼脂糖在沸水中融化后,倒入载玻片中浇注。琼脂糖凝胶凝固后,使用特制工具挖槽并加入染色后的血清样品。最后,将样品置于电泳槽中进行电泳,设定电压为120~130V,电流在3~4mA之间。经过15至55分钟后,可观察到分离的色带。

注意事项:1. 电泳样品需使用新鲜的空腹血清。2. 每块凝胶板上可平行制作两条小槽,以便同时添加两个样品。3. 如有需要,可使用有机玻璃片在琼脂糖凝固前固定位置,凝固后取出,留下小槽以便直接加样。4. 若需保留电泳样本,可将琼脂糖凝胶板放入清水中脱盐2小时后,在80℃环境下烘干。

结果及临床意义:1. 正常人血清脂蛋白可观察到三条色带,分别为β-脂蛋白、前β-脂蛋白和α-脂蛋白。2. 若前β-脂蛋白色带比α-脂蛋白深,且伴随甘油三酯明显升高,胆固醇水平正常或略高,提示为Ⅳ型高脂蛋白血症。3. 若β-脂蛋白区带明显加深,同时甘油三酯水平正常,且胆固醇明显增高,则为Ⅱa型;若胆固醇增高且前β略溶解则为Ⅱb型。4. β和前β区带连为“宽β区带”时,提示Ⅲ型血脂异常。5. 如果原点出现乳糜微粒,且血清甘油三酯明显增高,β和前β正常或减低,则为Ⅰ型血脂异常。

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