### 培养条件

培养条件气相：95%空气 + 5%二氧化碳；温度：37℃。人黑色素瘤细胞A875是一种源自人类皮肤癌的细胞系，广泛应用于肿瘤生物学研究、药物筛选及癌症机制探索。该细胞系经过STR（短串联重复序列）鉴定，确保了遗传特征的稳定性和细胞株的真实性。

### 传代方法

首次传代建议比例为1:2，传代验证后的两天需更换培养液。建议同时购买优质细胞，以享受优惠价格。收到细胞后，请在打开瓶盖前，确认培养瓶上的细胞名称是否与订单一致，并检查是否存在破损或泄漏等问题。如果没有异常情况，请用显微镜观察细胞的生长状态，并拍摄不同放大倍数的照片保存（建议40x、100x、200x各一张），前三天的照片为重要售后依据，若未提供照片，则默认收到状态良好。

### 贴壁细胞传代步骤

1. 弃去培养上清，使用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。

2. 添加0.25%胰蛋白酶约1-2ml至培养瓶，置于37℃培养箱消化1-2分钟，观察细胞消化情况。如果细胞大部分变圆并脱落，请迅速轻敲培养瓶，加入超过5ml的完全培养基以终止消化。

3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，悬液转移至15ml离心管，将其在1000RPM下离心5分钟，弃去上清，加入1-2ml完全培养基重悬。

4. 将细胞悬液按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，再放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

### 悬浮细胞传代步骤

1. 半换液法：将培养瓶竖立静置1小时，轻轻吸掉约3ml培养基，再补充3ml完全培养基。如培养基变色较慢，则可以直接添加约500ul的FBS。在传代时，可直接补给5ml培养基，通常如此传代3次后需进行离心传代以去除死细胞。

2. 离心换液法：若需分瓶，请将细胞悬液收集到离心管中，1000RPM离心5分钟，弃去上清后加入1-2ml培养基重悬，然后按1:2比例分到新T25瓶中，添加6-8ml新配置的完全培养基，以保证细胞的生长活力，后续的传代按1:2至1:5的比例进行。

### 细胞冻存与复苏步骤

#### 冻存步骤：

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液，并用PBS清洗细胞一次。

2. 添加0.25%胰蛋白酶约1ml至培养瓶，观察细胞状态，待其变圆后，加入5ml完全培养基终止消化，轻轻吹打使细胞脱落，悬液转移至离心管，1000RPM离心5分钟。

3. 弃去上清，沉淀后加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管。

4. 将冻存细胞放入-80℃冰箱，如果后续要转移至液氮罐，需在-80℃冰箱中存放超过24小时后再转入。

#### 复苏步骤：

1. 从液氮中取出细胞冻存管，迅速置于37℃水浴中解冻，直至无结晶，再用75%的酒精擦拭冻存管外壁。

2. 将冻存管的细胞转移到含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。

3. 弃去上清，沉淀用5ml完全培养基重悬，然后接种至T25培养瓶中，放于37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

4. 第二天更换为新鲜的完全培养基继续培养。

### 注意事项

有些细胞在运输过程中可能会出现脱落现象，这是正常的；如脱落严重，可以将培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清进行过渡培养。随后用胰酶轻轻处理，与完全培养基重悬，再按1:2比例分瓶传代，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5%CO2的细胞培养箱中培养。

### 问题判定标准

1. 如出现细胞运输问题（如细胞丢失、瓶破损、培养液漏液等），可申请重发。

2. 若收到产品48小时内发现细胞污染，请提供真实实验结果，核实后可重发。

3. 对于常温发货或干冰冻存发货的细胞，如未存活且提供细胞状态照片，可申请重发。

4. 如果细胞活性存在问题，请在收到产品7天内通过台盼蓝染色法检测活力，核实后可重发。

5. 在收到细胞后的当天及第2、3天内需拍照记录，超时未反馈则视为合格。

### 不予重发情况

1. 客户造成的细胞污染不予重发。

2. 客户因操作不当导致细胞状态不良的情况也不予重发。

3. 采用非本库推荐的细胞培养体系造成的状态不良不予重发。

4. 未提供前3天照片，且细胞状态不良的情况不予重发。

5. 在接收后的2天内未反馈问题的，视为产品合格。

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