918博天娱乐官网人结肠腺癌细胞LS1034培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：人结肠腺癌细胞LS1034

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P/S

传代方法：建议第一次传代比率为1:2

传代情况：每2天更换培养液

备注：使用无菌离心管收集培养基，作为对照培养之用。如对照效果不佳，建议直接购买918博天娱乐官网的完全培养基。

二、细胞收到后的处理

收到细胞后，先将其培养至良好状态，然后灌满完全培养液并密封瓶口，这是运输细胞的最佳方式。在收到细胞后，用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，放入超净台内进行无菌操作。然后将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，以确保细胞状态稳定。用显微镜观察细胞生长情况，并拍照记录（每种倍数至少留存一张：40x、100x、200x）。前三天的照片将作为售后服务的重要依据，未提供照片的情况下默认细胞状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

如果细胞汇合度未超过80%，将培养液收集至离心管中，留下5ml完全培养基并放入37℃、5% CO2孵箱；若细胞密度超过80%，可进行传代，具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS洗涤细胞1-2次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱内消化1-2分钟，观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速取回操作台，轻轻敲打培养瓶后添加5ml以上完全培养基以终止消化。
3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，然后将悬液转移至15ml离心管中，以1000RPM离心5分钟，弃去上清液，补加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按1:2比例分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞覆盖率达到培养瓶的80%时，弃去T25培养瓶中的培养液，并用PBS清洗细胞一次。
2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中，入显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养液以终止消化，再轻轻吹打细胞使其脱落，转移悬液至15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml的雅吉生物无血清冻存液，混匀后移入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱保存。如需转入液氮罐中，应先在-80℃冰箱存放超过24小时。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护面具），迅速放入37℃水浴中解冻，直至无结晶后，用75%酒精擦拭冻存管外壁。
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，重悬细胞于5ml完全培养基后接种至T25培养瓶中，放入37℃、5% CO2培养箱中继续培养。
4. 第二天更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

请注意，部分细胞在运输中可能因贴壁不稳而发生脱落，属于正常现象。如发现脱落较多，可收集培养液至离心管，1000RPM离心5分钟，收集上清进行对照培养。处理方式相同，使用胰酶处理后按照上述步骤进行分瓶传代，并补充新的培养基。

五、售后条款

1. 细胞出现问题的重发情况

若细胞在运输过程中出现偏差，如丢失、瓶身破损、培养液严重泄漏等，皆可重发。收到后48小时内如出现污染，应提供实验结果进行核实后重发。如常温发货的细胞静置24小时后多数未存活，需提供真实清晰的细胞状态照片，方可重发。此外，若收到细胞后未在2-3天内告知问题，将视为产品合格。

2. 不予重发的情况

如因客户自身原因造成的细胞污染、错误操作、非推荐培养体系、未提供前三天培养照片等，均不予以重发。具体情况需按照实际情况处理。

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